Subprojeto 35.1 - Aplicação de metodologias ultraestruturais para a visualização de moléculas no sistema receptor-ligante presentes na interação parasito-célula hospedeira.

Participantes: Suzana Côrte-Real Faria – Coordenador.

A avaliação da participação dos receptores de reconhecimento de padrões associados à patógenos presentes em células residentes e inflamatórias visa contribuir para a elucidação dos mecanismos envolvidos na resposta imune inicial e tardia na infecção por Leishmania. Os fibroblastos atuam no processo de resposta inflamatória na pele, como também são capazes de atuar como células hospedeiras para a Leishmania, nos primeiros momentos da infecção e durante a fase crônica latente da doença. Por outro lado, os fibrócitos, são células capazes de secretar quimiocinas e citocinas, além de expressar moléculas de adesão, sendo também passíveis à infecção por Leishmania. Os receptores de superfície celular são alvo de intensas investigações que buscam elucidar os mecanismos envolvidos na condução do perfil da resposta imune durante a interação destes receptores com moléculas da superfície de parasitos intracelulares obrigatórios. Objetivos específicos: (1) Analisar, in vitro, a expressão dos receptores TLR-2, TLR-4, TLR-6, RMF, FcR, FnR e Cr1/CR3, nas culturas primárias de fibroblastos de derme e fibrócitos do sangue periférico, infectados ou não por Leishmania (L) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis. (2) Investigar, in vitro, a participação dos receptores TLR-2, TLR-4, TLR-6, RMF, FcR, FnR e Cr1/CR3 na endocitose de L. (L) amazonensis e L. (V.) braziliensis. por células residentes e inflamatórias. As metodologias propostas no projeto serão realizadas no Laboratório de Biologia Estrutural (IOC) e na plataforma de Microscopia Eletrônica do IOC. São elas: 1.Culturas Primárias de Fibroblastos de Derme e Fibrócitos de Sangue Periférico. 2.isolamento e manutenção de amastigostas e promastigotas de L. (L) amazonensis e L. (V.) braziliensis. 3.infecção das culturas primárias com os parasitos, 4. processamentos para o preparo de especimes para microscopia eletrônica de transmissão. 5.crioultramicrotomia. 6.imunocitoquímica ultraestrutural 7. preparo das amostras para microscopia.